Mai 1997 - n°18
Protocole présenté en trois parties
La préparation de l'échantillon sur cartouche d'extraction SPE suit certaines étapes obligatoires qu'il est nécessaire de comprendre et de suivre. Cette première partie est consacrée aux 2premières étapes de la préparation qui en comprend6. (voir fig.1)
Il consiste à pré-traiter l'échantillon dans les conditions optimales pour réussir la préparation. Ces conditions sont les suivantes:
- L'échantillon ne doit pas être trop concentré. Il est dont important de le diluer si nécessaire pour ne pas colmater ou surcharger la cartouche.
- Toujours ajouter un standard interne pour évaluer le rendement de récupération de l'échantillon
- Dans le cas de matrice biologique (serum, plasma, tissu animal ou végétal...), les molécules à récupérer sont très souvent attachées sur les protéines (voir fig.2).
Il est alors indispensable d'acidifier l'échantillon pour couper les liaisons établies. La figure3 montre l'effet d'une acidification de l'échantillon sur le recouvrement. Dans le premier cas, l'échantillon est une solution saline et le recouvrement après passage sur la cartouche SPE est satisfaisant. Dans le deuxième cas, l'échantillon est contenu dans un sérum et le recouvrement est mauvais. Si on acidifie l'échantillon avant le passage sur cartouche, on libère les principes actifs des protéines et on obtient un rendement très supérieur. Notez que le type d'acide utilisé peut faire varier les rendements comme l'indique la figure4.
Dans le cas d'utilisation de cartouche d'extraction en phase inverse, il est nécessaire de conditionner également la cartouche avant le chargement de l'échantillon. Les cartouches d'extraction sont livrées asséchées, il est donc important de réactiver les groupements C18 pour retrouver la sélectivité de la cartouche. Ce conditionnement est réalisé en passant 1ml de méthanol sur la cartouche, il est ensuite nécessaire de passer 1à 2ml d'eau pour préparer la cartouche aux conditions initiales de chargement de l'échantillon. Si vous ne rincez pas votre cartouche avec de l'eau, votre échantillon en présence de méthanol va immédiatement être élué et ne sera pas retenu sur la cartouche.
Votre échantillon est alors prêt à être chargé sur la cartouche d'extraction conditionnée.
La deuxième partie du protocole traitera de la charge de l'échantillon et du rinçage de celui-ci au travers de la cartouche.
Alex Tisserand
Phase separations