Novembre 2007 - n°126
Nouveaux Tampons Accélérés pour
l’Analyse des Acides Aminés - Une Réduction du Temps d’Analyse
de 30%
Par Aurélie Lolia, Biochrom Ltd, Cambridge, UK
Introduction
L’augmentation constante du nombre d’échantillons à
analyser dans les laboratoires de contrôle qualité ou de sous-traitance
rend souvent difficile le respect des délais d’analyse. Pour
répondre au besoin d’analyses plus rapides sans sacrifier la
qualité de la séparation offerte par les analyseurs d’acides
aminés, Biochrom a développé une formulation améliorée
de ses tampons à base de citrate de sodium.
Instrumentation
L’Analyseur d’Acides Aminés Biochrom 30 est un système
compact de chromatographie liquide, contrôlé par PC, entièrement
dédié et spécifique à l’analyse des acides
aminés pour les applications des industries pharmaceutique, protéomique
et agroalimentaire. Un large éventail d’échantillons peut
être analysé à l’aide des différents programmes,
colonnes et tampons disponibles.
Le Biochrom 32 Oxidised Protein System, comprend l’ensemble des réactifs
et consommables nécessaires pour les analyses de routine d’hydrolysats
complexes tels que les échantillons d’alimentation humaine ou
animale. Les acides aminés sont séparés par chromatographie
par échange d’ions et quantifiés par une analyse photométrique
à deux longueurs d’onde après dérivatisation post
colonne à la ninhydrine, comme cela est requis par la méthode
officielle AOAC et la directive 98/64/EC. Grâce à la qualité
de séparation, à l’excellente reproductibilité
des temps de rétention et des surfaces de pics, ainsi qu’ à
la stabilité de la calibration, l’utilisation d’analyseurs
d’acides aminés est devenue la méthode standard d’analyse
en alimentation animale. De plus, la résine utilisée dans la
colonne de séparation présente une très grande résistance
aux effets de matrice, ce qui est particulièrement important compte
tenu de la composition complexe des échantillons.
Conditions Expérimentales
Le système de tampons accélérés est un kit spécialement
formulé pour les analyses rapides d’échantillons oxydés
en alimentation humaine ou animale. Il est composé d’un jeu de
4 tampons, d’un pH variant de 3,2 à 9,2, et d’une solution
de régénération d’hydroxyde de sodium.
Le système de tampons accélérés est compatible
avec toutes les colonnes Biochrom de forme sodium et peut donc être
utilisé sur l’analyseur Biochrom 32 Oxidised Protein System ainsi
que sur l’analyseur Biochrom 31 Protein System, sans modification des
conditions expérimentales excepté pour le programme d’analyse.
Celui-ci a été spécialement développé pour
atteindre une séparation optimale des pics avec le Système de
tampons accélérés en conservant des débits de
tampons et de ninhydrine respectivement de 35 mL/hr et 25 mL/hr.
Résultats
Comme le montrent les chromatogrammes grâce à l’utilisation
de ce système de tampons améliorés, l’arginine
élue à environ 45 min au lieu de 60 min pour le système
classique Haute Performance. La qualité de la séparation reste
excellente avec des pourcentages de séparation supérieurs à
95% pour la plupart des acides aminés généralement trouvés
dans les produits d’alimentation humaine ou animale. La séparation
entre les acides aminés d’intérêt spécifique,
tels que la méthionine sulfone et l’acide aspartique, est également
maintenue.
En plus d’une réduction significative du temps d’analyse,
l’avantage de ce système réside également dans
l’obtention d’une ligne de base plus lisse sous la cystine ce
qui permet une quantification plus précise de cet acide aminé.
Le système offre une plus grande flexibilité pour l’analyse
d’autres acides aminés d’intérêt tels que
la taurine, l’acide 2,6-diaminopimélique, la ß-alanine,
la glucosamine, la galactosamine et l’hydroxylysine. La séparation
complète de 30 acides aminés est ainsi réalisée
en moins de 50 min.
Références
1. J. Fontaine, CAB International, Amino Acids in Animal Nutrition
(2), (2003)
2. M. Davies, The Biochrom Handbook of Amino Acids