Pour la production de vecteurs VAA, PlasmidFactory propose dans le monde entier, et de façon exclusive, un système à 2 plasmides pour la transfection de lignées cellulaires productrices (par exemple HEK293), remplaçant l'ancien système à 3 plasmides et causant un coût de revient important pour l'utilisateur.
Une construction porte les fonctions d'encapsidation du VAA, de type rép et cap, et les fonctions auxiliaires adénovirales. Sur la seconde construction, le gène eucaryote d'intérêt est présent, flanqué de séquences de répétition terminale inversée (RTI).
Sauvetage RTI (ITR Rescue®)
Le contrôle de qualité standard pour les séquences RTI consiste en une digestion de restriction avec Smal. Cependant, ce n'est pas exact à 100% et la fraction de plasmides non intacts ne peut pas être quantifiée.
Grâce à un séquençage spécial de nouvelle génération, établi par PlasmidFactory, les séquences RTI peuvent être séquencées et quantifiées, complétant les techniques de fermentation de PlasmidFactory pour maintenir intacts les plasmides.
Mini-cercles VAA
Des améliorations au niveau de l'ADN conduisent également à un rendement significativement plus élevé dans la fabrication de l'AAV - l'utilisation de minicercles pour la production de vecteurs AAV : Comme les séquences de squelette bactériennes nécessaires uniquement pour l'amplification dans E. coli sont éliminées pendant la production de MC, l'encapsidation des séquences de squelette plasmidiques procaryotes est évitée. Cela revêt une importance particulière pour les préparations de vecteurs scVAA, qui contiennent une quantité non proportionnelle de séquences de squelette plasmidique. Le remplacement des plasmides par des constructions MC optimise également de manière significative l'efficacité des préparations VAA et, par conséquent, des préparations de vecteurs VAA.
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