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Mini-cercles de PlasmidFactory pour la production d’AAV

01/06/2020

Les vecteurs viraux adéno-associés (AAV) sont considérés comme l’un des systèmes d’administration les plus prometteurs en thérapie génique humaine. De plus, les vecteurs AAV sont des outils fréquemment utilisés dans la recherche préclinique et fondamentale. Cependant, la fabrication de préparations de vecteurs AAV purs reste une tâche difficile.

Bien que les capsides vides puissent être éliminées des préparations de vecteurs grâce à leur densité plus faible, les stratégies de purification les plus récentes n’ont pas encore permis d’éliminer celles contenant les gènes de résistance aux antibiotiques ou d’autres séquences de squelette plasmidique.
Les vecteurs viraux adéno-associés (AAV) étant produits par co-transfection de cellules productrices de HEK293, de tels motifs de séquence bactérienne peuvent également être un problème de transfert de gène à médiation par un vecteur AAV. Dans ce cas, à la suite d’événements dits de conditionnement inverse, un transfert induit par le vecteur AAV du gène thérapeutique, mais également du gène de résistance aux antibiotiques dans les cellules cibles a été décrit. Par conséquent, cela semble constituer un risque potentiel de vecteurs AAV dérivés de plasmides, qui peut être surmonté en utilisant de l’ADN en mini-cercles pour la production d’AAV.

 

PlasmidFactory propose désormais la production de telles constructions de mini-cercles (MC) pour remplacer le vecteur AAV, ainsi que les plasmides auxiliaires et de conditionnement pour la production de vecteurs AAV. Les séquences du squelette bactérien étant éliminées lors de la production de MC, l’encapsidation des séquences du squelette du plasmide procaryote est évitée. Cela revêt une importance particulière pour les préparations de vecteurs AAV, qui contiennent une quantité non proportionnelle de séquences de squelette plasmidique.
Le remplacement des plasmides de conditionnement standard par des constructions MC a non seulement permis de réduire ces contaminations au-dessous de la limite de quantification, mais également d’améliorer l’efficacité de transduction des préparations d’AAV. Ainsi, la technologie MC de PlasmidFactory produit un ADN en mini-cercles super enroulé pur, monomère, et constitue une modification facile à mettre en œuvre des protocoles de conditionnement d’AVA standard qui améliore considérablement la qualité des préparations de vecteurs AAV.

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Contact :
PlasmidFactory GmbH & Co. KG

Dr. Marco Schmeer
info@PlasmidFactory.com - www.PlasmidFactory.com




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